[실험]

1. 실험제목 : 단백질 정량

2. 실험날짜 : 2004년 30일 토요일

3. 제출자 및 공동 실험자

4. 목적
☞ Lowry method와 Bradford Assay를 사용하여 단백질을 정량한다.

5. 원리
단백질에 대한 실험을 하는데 있어서 무엇보다도 그 농도를 아는 것이 중요하다. 단백질을 정량하는 방법 중 가장 널리 쓰이는 것은 ultraviolet(UV) spectrophotometry, Biuret method, Lowry method, BCA and Bradford Assya이다.

☞ UV spectrophotometry
UV에 의한 정량법은 단백질 내의 tyrosine과 tryptphan의 phenol과 indolic group에 의해 280nm에서 흡광하는 성질을 이용하는 방법이다. 정확한 양을 알기보다는 존재유무 등을 확일할 때 쓰인다.
장점 : 가장 쉽게 측정 할 수 있고 측정후에 단백질이 변성되지 않음.
단점 : 0.05-2mg/mL정도의 단백질이 있어야 하고 각 단백질들의 amino acid의 종성에 따라 그 값이 달라질 수 있음.

☞ Biuret methold
이 방법은 알칼리 조건하에서 copper ion이 단백질의 peptide nitrogen과 peptide에 결합하여 540-560nm에서 흡광을 하는 보라색을 나타낸다. 이 반응은 UV방법과는 달리 구리가 peptide에 결합한다.
장점 :…(생략)