콜레스테롤실험

2. MATERIAL
Tip, Pippet, Test tube, spectro-20, D.W, 비커, Centrifuge, Fecl3, H2SO4, Ethylacetate ethanol, 삼각플리스크, Tritonx-100, cleanbanch
3. METHOD

1. 혈액을 상온에서 응고될때까지 기다린 후 냉장고에서 냉각

2. 약 3000rpm 5min가 원심 분리

3. sup만 따로 모은다.

(1) cholesterol standard curve 작성

a.
표준용액(1mg/ml)
0.5
1.0
1.5
2.0
2.5
ethylacetate
-etanol(ml)

4.5

4
3.5
3.0
2.5
썩어 3000rpm 5min 원심분리
b. sup. 0.5ml + Fecl3 1ml + H2SO4 1ml을 섞는다.
c. A550에서 흡광도 측정
d. standard curve 작성
(2) cholesterol 총량
a. 혈청 0.5ml + ethylacetate ethanol 5ml를 섞는다.
b. 3000rpm, 5분 원심분리
c. sup. 0.5ml + Fecl3 1ml + H2SO4 1ml을 섞는다.
(3) free cholesterol 양 측정
a. (2) 추출액 0.6ml + Tritonx-100 2ml을 섞는다.
b. 10분간 상온에서 incubation
c…(생략)

e. acetone 완전히 제거후 ethylacetate 0.3ml + Fecl3 1ml + H2SO4 1ml을 섞는다.

f. A550에서 흡광도 측정

g. 양 측정